PCR实验室建设所需资料

PCR实验室建设所需资料

标本制备区

该区域主要进行的操作为临床标本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成。

标本制备区配备有2~8°C冰箱和-20°C冰箱，计算冷负荷时，需要将它们计算在内。在标本制备区，还需要配备生物安全柜，用于进行提取核酸的操作。

为避免提取的核酸在柜内反复循环，造成标本之间的交叉污染，出现假阳性结果，该区域配备的生物安全柜是B2型的。生物安全柜工作区垂直气流来自实验室，排风经过过滤器过滤后直接排至室外，不允许回到安全柜和实验室中。

根据经验，如果实验室内配备生物安全柜，每配备一台，实验室的面积增加10m2;标本制备区的面积宜在25m2~30m2之间。本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为正压，以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。

扩增室

该区域主要进行的操作为DNA或cDNA扩增。此外，已制备的DNA模板和合成的cDNA(来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。

在巢式PCR测定中，通常在一轮扩增后打开反应管，因此巢式扩增有较高的污染危险性，二次加样在本区内进行。

扩增室主要配备PCR实验室的仪器PCR仪，本文实例中使用了ABI7500和ABI9700两种PCR仪。

在实验室建造过程中，需要给PCR仪配备专门的UPS电源，以保障其正常工作。该区面积控制在15m2~20m2。

本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为负压，以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染，应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应在超净台内进行。建议采用5~10Pa压差，在控制上比较容易实现。

产物分析区

该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。如使用全自动封闭分析仪器检测，此区域可不设。

在室内配备通风橱，保障房间内的相对负压，空气从室外流向室内。该区面积控制在15m²~20m²。

本区是主要的扩增产物污染来源，因此对本区的压力梯度的要求为:相对于邻近区域为负压，以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。建议采用5~10Pa压差，在控制上比较容易实现。

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正负压区域缓冲室的设置

根据压力梯度的要求，试剂配制室和样品处理室为相对正压，扩增室和产物分析室为相对负压，要求正压的区域和要求负压的区域的缓冲室内的压力设计大不相同。

正压缓冲室符合一般正压洁净室的缓冲原则，主要是防止室外环境空气中的气溶胶进入室内。

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